EGFR（Epidermal Growth Factor Receptor）是上皮生長(zhǎng)因子（EGF）細(xì)胞增殖和信號(hào) 傳導(dǎo)的受體，EGFR 是一種糖蛋白，屬于酪氨酸激酶型受體，位于細(xì)胞膜表面，靠與配體 結(jié)合來激活。EGFR 與腫瘤細(xì)胞的增殖、血管生成、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及細(xì)胞凋亡的抑制有 關(guān)。EGFR 基因突變是預(yù)測(cè) NSCLC 患者使用 EGFR-TKIs 療效的重要靶標(biāo)。

      EGFR 酪氨酸激酶區(qū)域的突變主要發(fā)生在 18-21 外顯子，其中 19 號(hào)和 21 號(hào)外顯子突 變覆蓋突變的 90%。EGFR 突變主要包括 4 種類型：外顯子 19 缺失突變、外顯子 21 點(diǎn)突 變、外顯子 18 點(diǎn)突變和外顯子 20 插入突變。最常見的 EGFR 突變?yōu)橥怙@子 19 缺失突變 和外顯子 21 點(diǎn)突變，二者均會(huì)導(dǎo)致酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域活化。EGFR 基因突變可以分為兩大 類，一個(gè)是藥物敏感突變，也就是突變后可以使用某種靶向藥物（如 19 缺失，L858R 突 變），另一個(gè)是耐藥突變，即突變后對(duì)某種靶向藥物耐藥（如 T790M 突變）。

      BaF3（小鼠原 B 細(xì)胞）的生長(zhǎng)和增殖需要 IL-3 的維持。通過引入各種表達(dá)激酶的基因， 能作為 BaF3 的驅(qū)動(dòng)基因，讓 BaF3 不再依賴 IL-3 而增殖，進(jìn)而激酶基因成為 BaF3 增殖依 賴的驅(qū)動(dòng)基因，用于評(píng)估小分子藥物對(duì)激酶的靶向抑制作用，原理及流程見下圖所示。
 

Figure 1. EGFR[Del19-T790M-C797S] BaF3 細(xì)胞的構(gòu)建原理圖

1. WB of EGFR Del19/T790M/C797S expression

Lane 1: Negative control
Lane 2: EGFR-Del19/T790M/C797S

Figure 2. WB of EGFR Expression
 

2.Sanger sequencing

Figure 3. EGFR Del19-T790M-C797S/BaF3  Del19

Figure 4. EGFR Del19-T790M-C797S/BaF3  T790M-C797S
 

3. Anti-proliferation assay

Figure 5. Recombinant EGFR Del19-T790M-C797S/BaF3 stably expressing EGFR.
 

Figure 6. CTG Proliferation Assay of EGFR [DEL19-T790M] C797S BaF3 (C2).