Severe acute respiratory syndrome (SARS)于2003年二月在亞洲第一次被報道，繼而傳播到全球十幾個國家，SARS屬于一種冠狀病毒，是一類具有囊膜、基因組為線性單股正鏈的RNA病毒，對應(yīng)的結(jié)構(gòu)示意圖如下：

根據(jù)CDC和WHO的介紹，針對SARS的核酸診斷一般是針對ORF1ab/RdRP(RNA-dependent RNA polymerase)、Gene N、Gene M和Gene E， Gene S更多用于對應(yīng)藥物和疫苗的開發(fā)。NCBI收錄序列為NC_004718.3，全長29751bp，基因編碼4個結(jié)構(gòu)蛋白：S，M，N和E。

試劑盒的檢測限問題，是造成假陰性的最大根源，因此針對診斷產(chǎn)品的檢測限，我們需要認(rèn)真做每款試劑盒的性能評價。以往針對檢測限的性能評價，一般是選擇體外轉(zhuǎn)錄的RNA、或者臨床陽性病毒來作為標(biāo)準(zhǔn)品，用于性能評價。但是兩者都具有很明顯的確定，首先體外轉(zhuǎn)錄的RNA，一般是很純，單一，不涉及提取，不符合臨床病毒的微環(huán)境，因此必然造成檢測靈敏度被高估，這也是存在高概率假陰性的主要原因；再次臨床陽性病毒，即使是滅活的病毒，也是存在很大的生物安全隱患，因此要求實驗室級別為P3-P4，大部分開發(fā)診斷試劑盒單位都不滿足改要求，另外臨床陽性病毒也是來源很有限，不能被穩(wěn)定供應(yīng)，反復(fù)用于試劑盒的性能評價。

有病毒的完整包膜結(jié)構(gòu)，有SARS對應(yīng)的核酸序列，但是生物安全風(fēng)險較低的假病毒標(biāo)準(zhǔn)品，完美的克服了選擇體外轉(zhuǎn)錄的RNA、或者臨床陽性病毒來作為標(biāo)準(zhǔn)品的缺點(diǎn)，非常適合用于核酸診斷性能評價的標(biāo)準(zhǔn)品。

構(gòu)建過程：SARS基因合成→假病毒包裝→純化→QC檢測（ddPCR）

Gene E（231bp) 

• 根據(jù)SARS冠狀病毒的特點(diǎn)，選取了ORF1ab/RdRP（RNA-dependent RNA polymerase）、Gene E(envelope protein)、Gene N(nucleocapsid phosphoprotein)、Gene M合計4個區(qū)段的序列，用于假病毒的包裝，4個區(qū)段很好的表征了SARS的特征序列；

• 科佰生物設(shè)計了ddPCR體系的引物、探針序列，可不需要構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提下完成對假病毒的QC拷貝數(shù)檢測，非常準(zhǔn)確表征標(biāo)準(zhǔn)品的拷貝數(shù)，而且克服了Q-PCR分析CT值的相對判斷標(biāo)準(zhǔn)的不準(zhǔn)確性；

• 假病毒標(biāo)準(zhǔn)品，無致病性，可再生，質(zhì)控方法可靠，批次間穩(wěn)定，可以長期穩(wěn)定制備和供應(yīng)，而且要求實驗室生物安全級別為P2，滿足很多單位的安全需求。

Gene E:

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